DNA提取試劑盒是由一對引物介導，能在動(dòng)植物體外對特定基因（DNA）片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的（1+E）n（0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

 

　　DNA提取試劑盒的實(shí)驗目的：

　　1、掌握PCR法擴增目的基因片段的基本原理與方法；

　　2、通過(guò)PCR驗證目的基因片段是否插入質(zhì)粒中；

　　3、充分理解本學(xué)期三次分子實(shí)驗的原理、聯(lián)系與意義。

 

　　實(shí)驗原理：

　　分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)基本原理：

　　PCR即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過(guò)程。是一項DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴增一定長(cháng)度的DNA片段?？捎糜诨蚍蛛x克隆，序列分析，基因表達調控，基因多態(tài)性研究等許多方面。

　　在高溫（94℃）下，待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板；而后在低溫（37～55℃）情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結合，形成部分雙鏈；在普通Taq酶的最適溫度（72℃）下，以引物3’端為合成的起點(diǎn)，以d NTP為原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新鏈。這樣，每一雙鏈的DNA模板，經(jīng)過(guò)一次解鏈、退火、延伸三個(gè)步驟的熱循環(huán)后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復進(jìn)行，每一次循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一次循環(huán)的模板，每一次循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增一倍，PCR產(chǎn)物得以2n的形式迅速擴增，經(jīng)過(guò)25～30個(gè)循環(huán)后，理論上可使基因擴增10 倍以上。