微滴式數字PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法，可以作為傳統實(shí)時(shí)定量PCR的替代方法，以實(shí)現一致定量及稀有等位基因的檢測。數字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應，部分這些反應包含了靶標分子（陽(yáng)性），而其他不包含（陰性）。單個(gè)分子可以被擴增一百萬(wàn)倍或更多。在擴增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標記探針可用于檢測特定序列的靶標。當不存在任何靶標序列時(shí)，沒(méi)有信號累積。PCR分析后，陰性反應片段用于生成樣品中靶標分子的一致計數，而無(wú)需標準品或內標。

 

　　功能/主要應用：                                                                 

　　1、微滴式數字PCR儀采用一種全新的方式進(jìn)行核酸分子的定量，與傳統PCR、定量PCR相比，其結果的精確度、準確性和靈敏度更加。其定量的結果不再依賴(lài)于Cq值而直接給出靶序列的起始拷貝數濃度，實(shí)現真正意義上的絕對定量。

　　2、主要應用于疾病相關(guān)分子標記物檢測，稀有突變序列檢測，病原微生物檢測，食品安全及轉基因成分檢測，拷貝數變異遺傳分析，基因表達分析等。

 

　　影響微滴式數字PCR儀的控制因素：

　　1、微滴式數字PCR儀之間的差別對實(shí)驗結果的影響。沒(méi)有任何兩臺PCR儀器的溫度控制是一模一樣的。相對于預設的溫度模塊溫度總是偏高或偏低，就是同一模塊不同的孔之間，溫度有時(shí)也會(huì )不一樣，相差可能達幾攝氏度之多。一些PCR儀溫度控制性能的不足造成的后果是：當PCR儀的模塊溫度在升溫時(shí)，溫度過(guò)沖或不足，不能準確的達到預設的平臺溫度。

　　2、溫度控制技術(shù)的差別對實(shí)驗結果的影響。導致PCR儀溫度控制性能優(yōu)劣的因素，首先是溫度控制技術(shù)。調節PCR儀模塊的溫度，使其達到并保持在某一溫度有很多方式。每一種方式都有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。另外，這些技術(shù)被運用控制的水平對于溫度控制的水準是很重要的，且有很大不同。大多數微滴式數字PCR儀的溫度控制性能是很差的。在單一或多傳感器控制機制上的不同顯而易見(jiàn)的引起了溫度的不均一性。

　　3、儀器老化對實(shí)驗結果的影響。雖然PCR儀沒(méi)有任何的機械或可移動(dòng)部件，但是那并不意味著(zhù)它不會(huì )磨損。電子器件的性能會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)而老化，并由于過(guò)度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨損會(huì )引起模塊的熱斑或冷斑，通常PCR儀器不能識別這種由于機械磨損，模塊延展和收縮效應引起的溫控性能的不同。因此，為掌握這些情況，實(shí)時(shí)監測PCR儀的溫度控制性能是重要的。出于同樣的原因，PCR儀溫控性能的失常通常是實(shí)驗失敗或毀壞循環(huán)反應的重要原因。